Ingrid 't Hart

113 Summary / Samenva�ng 6 wordt. Een andere veelbelovende methode is een chemo-enzyma�sche strategie waar chemisch gesynthe�seerd lactosylceramide (Lac-Cer) verder wordt uitgebouwd door bacteriële glycosyltransferases. Stereo- en regioselec�viteit zijn belangrijke factoren in de suikerchemie. Regioselec�viteit wordt over het algemeen verkregen door het gebruik van orthogonale beschermgroepen. Op deze manier kan er één hydroxylgroep beschikbaar zijn als nucleofiel in de acceptor. Stereoselec�viteit sturen is uitdagender in chemische glycosyleringen. Over het algemeen worden 1,2- trans verbindingen (β in het geval van Glc of Gal) gecontroleerd gesynthe�seerd door naburige groep par�cipa�e door een C-2 ester. De vorming van 1,2- cis verbindingen (α in het geval van Glc of Gal) is moeilijker, alhoewel er een aantal manieren zijn gevonden om de β-kant te blokkeren. Eén van deze benaderingen gaat uit van een chirale groep, gelinkt tussen C-1 en C-2 door een trans -decalin systeem. Een andere benadering maakt gebruik van sterische bulk van een di- tert -butyl-silaan groep op de C-4 en C-6 hydroxylgroepen van galactose. Naast chemische synthese kunnen oligosachariden ook door enzymen gesynthe�seerd worden. Over het algemeen zijn enzymen stereo- en regioselec�ef, maar kunnen het expressievolume en de ac�viteit van het enzymen de dure suiker nucleo�den zorgen voor een kleinere schaal en lagere opbrengsten. Enzymen uit zoogdieren zijn vaak selec�ever, maar moeilijk tot expressie te brengen. Bacteriële enzymen zijn makkelijker tot expressie te brengen, maar zijn ook minder selec�ef, wat zowel een voor- als nadelig gevolg kan hebben. Verschillende bacteriële enzymen zijn gevonden en tot expressie gebracht, die gebruikt kunnen worden voor de synthese van globo- en ganglio-serie van GSLs. Hoofdstuk 2 Een ganglioside uit de globo-serie, disialosyl globopentaosylceramide (DSGb5), wordt vaak gedetecteerd in nierkankercellen. Er is eens sterk vermoeden dat DSGb5 Siglec-7 bindt: een immuunonderdrukkend eiwit, vooral gevonden op NK-cellen. Op deze manier kan DSGb5 ervoor zorgen dat kanker cellen ontkomen aan detec�e en opruiming door immuuncellen. Wij hebben een chemo-enzyma�sche strategie ontworpen om DSGb5 te synthe�seren, zodat we de bindingseigenschappen met Siglec-7 nader kunnen bestuderen. Het pentasacharide Gb5 vormt de basis van DSGb5 en werd gesynthe�seerd door de chemische glycosylering van een di- en trisacharide. Allereerst werden vier bouwstenen gesynthe�seerd met de benodigde beschermgroepen om de juiste stereo- en regioselec�viteit te kunnen faciliteren. De α-configura�e in Galα1,4Lactose werd gevormd door een galactose donor met een di- tert -butyl-silane groep, welke zorgt voor een sterische bulk en daarmee vorming van het β-anomeer verhinderd. Alle overige glycosyleringen werden gefaciliteerd door C-2 esters, om zo β-configura�e te verkrijgen. De chemische glycosylering van het Galβ1,3GalNAc disacharide met het Galα1,4Lac trisacharide resulteerde in een mengsel van anomeren, wanneer het disacharide een benzylideen acetaal beva�e. Toen het benzylideen acetaal vervangen werd door C-4 en C-6 acetyl groepen, werd alleen het gewenste β-product gevormd. Na volledige ontscherming van Gb5 werden twee enzymen, ST3Gal1 en ST6GalNAc6, gebruikt om zowel het terminale α2,3- en de interne α2,6-siaalzuren te koppelen. De plantlec�nes SBA (herkent Gal of GalNAc) en WGA (herkent GlcNAc of siaalzuren) toonden aan dat Gb5, MSGb5 en DSGb5 correct waren geprint op de micro-array slide. Verder werd er geconstateerd dat Siglec-7 niet aan DSGb5 bindt, maar wel aan structuren die α2,3-α2,8- gelinkte siaalzuren beva�en.