Ingrid 't Hart

115 Summary / Samenva�ng 6 was gekozen om zo dicht mogelijk bij het natuurlijk gelinkte O -glycaan te blijven en de linker was gekozen om het oligosaccharide te kunnen immobiliseren in een latere fase. Verschillende GalN 3 donoren werden getest om de gewenste 1,2- cis (α)-configura�e te vormen. Het beste resultaat werd verkregen door een 3,4,6-tri- O -geacetyleerd trichloroace�midaat donor (~1/1 α/β mengsel). Na verwijdering van de acetylgroepen en de installa�e van een benzylideen acetaal op C-4 en C-6, konden de α- en β-anomeren gescheiden worden door silica kolom chromatografie. Alle overige chemische glycosyleringen vonden plaats in DCM in de aanwezigheid van TMSOTf en 4 Å MS bij een temperatuur van 40 °C to -70 °C. Deze condi�es resulteerden in alle gevallen in het pure β-anomeer en opbrengsten varieerden van 40% tot 72%. Na de ontschermingen en sulfatering van SM1a-core3 zal dit sulfoglycolipide analoog worden bestudeerd voor zijn bindingseigenschappen voor het HAE3 an�lichaam in een microarray. Hoofdstuk 5 Gangliosiden en ganglioside-ach�ge structuren zijn niet alleen veel geassocieerd met kanker, maar ook met auto-immuun ziekten. Guillian-Barré syndroom (GBS) is zo’n autoimmuun ziekte, waar de perifere zenuwen worden aangetast, wat kan resulteren in verzwakte spieren of zelfs verlamming. Een derde van de gevallen van GBS wordt voorafgegaan door een infec�e met de bacterie Campylobacter jejuni. C. jejuni is een gramnega�eve bacterie en hee� lipooligosacchariden (LOS) in het buitenste membraan. Dit LOS kan ganglioside-ach�ge structuren beva�en en zorgenmogelijk voor an�lichamen die ook gangliosiden in het menselijk lichaam kunnen aantasten. Verschillende an�- ganglioside an�lichamen zijn gevonden in serum van GBS pa�ënten, waaronder GM1a, GM1b en GD1a. Deze ganglio-serie gangliosiden kunnen hoofdzakelijk gevonden worden in het perifere zenuwstelsel, wat de symptomen van de ziekte zou kunnen verklaren. In dit hoofdstuk beschrijven wij de synthese van ganglioside-ach�ge structuren om op zoek te gaan naar een bindingspatroon van an�-ganglioside an�lichamen in GBS serum. Het kleinste verschil tussen de ganglioside-ach�ge structuur van C. jejuni en de menselijke gangliosiden is de monosacharide L- glycero -D-manno-heptose (Hep). Heptose wordt alleen gevonden in gramnega�eve bacteriën en kan mogelijk een rol spelen in de vorming van de an�-ganglioside an�lichamen. Om deze reden hebben wij een chemo-enzyma�sche strategie bedacht om heptose-gangliosiden te synthe�seren. Allereerst werd het Galβ1,3Hep disacharide verkregen door chemische glycosylering van een galactose donor en heptose acceptor. Vervolgens is dit disacharide ontdaan van zijn beschermgroepen en werden bacteriële enzymen gebruikt om de ganglioside-ach�ge structuren te maken. PmST1 werd gebruikt om Hep-GM3 te maken, CgtA voor Hep- GM2 en CgtB voor Hep-GM1. Het enzym CgtA was opvallend onstabiel en het cellysaat moest direct na expressie gebruikt worden om voldoende ac�viteit te hebben voor de omze�en van Hep-GM3 naar Hep-GM2. Alle gesynthe�seerde structuren beva�en een aminopentyl linker voor immobilisa�e op een microarray. Naast de gesynthe�seerde structuren zullen ook de ganglioside oligosachariden geprint worden, om zo een patroon te kunnen ontdekken in de binding van an�-ganglioside an�lichamen in GBS serum.