391 Summary in Dutch A we dat geëxpandeerde hartspiercellen hetzelfde functioneren als niet geëxpandeerde hartspiercellen, waardoor deze geschikt zijn voor meerdere transnationale en regeneratieve toepassingen. In hoofdstuk 4 beschrijven we een gedetailleerd protocol dat grootschalige hartspiercel productie mogelijk maakt (tot een 250-voudige toename van het aantal hartspiercellen binnen 3-5 weken) van meerdere stamcel lijnen. Na het toevoegen van de GSK-3α/β inihitor CHIR, observeerden we een celdeling in 37% van de hartspiercellen. Bovendien kunnen we de prijs van de hartspiercel productie hiermee met ~70% verlagen vergeleken met het standaard differentiatieprotocol op basis van Wnt signalering. Tot slot beschrijven we een methode voor het invriezen van geëxpandeerde hartspiercellen tijdens de eerste 1 á 2 passages om de biobanking van vele hartspiercellen mogelijk te maken. In dit hoofdstuk concluderen we dat het verwijderen van cel-cel contact in combinatie met CHIR, een kostenverlagende strategie die verschillende processen zoals het nabootsen van ziekten, grootschalige screenings van medicijnen en regeneratieve toepassingen aanzienlijk zal vergemakkelijken. In hoofdstuk 5 gaven we inzicht in de afbraak en opbouw van sarcomeren (de spierbundels van hartspiercellen) tijdens de hartspiercel deling en beschrijven we een techniek voor gemakkelijke genetische manipulatie in hiPSC-CMs. We bestudeerden time-lapse foto’s van de sarcomeer afbraak en opbouw tijdens de celdeling en analyseerden de hoeveelheid celkernen en/of celdeling in expanderende hiPSC-CMs. We zagen dat cytokinese optrad in 13-40%, mitose in 1,5-2,5% en multinucleatie in 0,6-1,7% van de gevallen. Multinucleatie als gevolg van binucleaire cellen in de M-fase was een zeldzame gebeurtenis (0,1-0,2%). We zagen dat tijdens de celdeling de afbraak van sarcomeren voornamelijk geactiveerd wordt tijdens de metafase, anafase en telofase en dat deze hartspiercellen tijdelijk stoppen met hun contractie. Tijdens de G0- of G1/S/G2-fasen, worden de sarcomeren vervolgens weer hersteld en wordt de spontane contractie hervat. Ten tweede ontdekten we dat tijdens de toediening van de GSK-3α/β inihitor CHIR, de transfectie-efficiëntie hiPSC-CMs verhoogd werd tot meer dan 30%, wat overeenkomt met andere celtypes. In dit hoofdstuk concluderen we dat de afbraak van sarcomeren nodig is voor de celdeling van hartspiercellen en dat meer sarcomeer afbraak in hartspiercellen de incorporatie voor genetische manipulatie in de hartspier verbeterd. In hoofdstuk 6 bestudeerden we het effect van hypoxie (zuurstof vermindering) op hiPSCCMs gekweekt in een maturatie medium. Wanneer hartspiercellen niet genoeg gematureerd zijn, representeren deze niet het volwassen humane hart en zorgt dit voor een belemmering van studies naar hartziekes. Het geteste maturatie medium bevat een laag suiker gehalte en meer vetten, waardoor dit meer overeenkomt met de omgeving in het volwassen hart. In deze studie tonen we aan dat hiPSC-CMs zijn pas gevoelig voor hypoxie en cellulaire schade nadat deze gekweekt zijn in het maturatie medium. Ten tweede valideerden we het beschermende effect van de necroptose-inhibitor (nec-1) in hiPSC-CMs gekweekt in maturatie medium en hypoxie. We bevestigden dat nec-1 de cellulaire schade na de hypoxie kon voorkomen, wat
RkJQdWJsaXNoZXIy MTk4NDMw